如何檢測(cè)Ⅲ型超敏反應(yīng)中的循環(huán)免疫復(fù)合物?
在臨床上,III型超敏反應(yīng)是指由可溶性抗原與特異性抗體結(jié)合形成的中等大小的免疫復(fù)合物(ICs)沉積于組織中引發(fā)的一系列炎癥反應(yīng)。檢測(cè)循環(huán)中的免疫復(fù)合物對(duì)于診斷和評(píng)估III型超敏反應(yīng)相關(guān)疾病具有重要意義。以下是幾種常用的檢測(cè)方法:
1. 聚乙二醇沉淀法:聚乙二醇可以降低水相溶劑的介電常數(shù),從而促進(jìn)免疫復(fù)合物的聚集并使其從溶液中沉淀出來(lái)。通過(guò)離心收集沉淀物,并進(jìn)行進(jìn)一步分析。
2. 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn):利用補(bǔ)體系統(tǒng)在免疫復(fù)合物形成過(guò)程中被激活的特點(diǎn)來(lái)間接檢測(cè)ICs。當(dāng)血清中的免疫復(fù)合物與紅細(xì)胞表面抗原發(fā)生反應(yīng)時(shí),會(huì)消耗掉一部分C3b成分,導(dǎo)致后續(xù)的溶血反應(yīng)減弱或消失。根據(jù)這種變化可判斷樣本中是否存在高水平的循環(huán)免疫復(fù)合物。
3. C1q固相試驗(yàn):基于C1q對(duì)免疫復(fù)合物具有高度親和力這一特性設(shè)計(jì)而成。將抗原包被于固相載體上,加入待測(cè)血清后若含有相應(yīng)抗體則會(huì)形成ICs;再添加標(biāo)記有酶的C1q,通過(guò)顯色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)ICs的存在。
4. 免疫比濁法:該方法利用免疫復(fù)合物在特定波長(zhǎng)下具有一定的光散射特性。將抗原與待測(cè)血清混合后,在一定條件下讓其充分反應(yīng)形成ICs;然后測(cè)定其在特定波長(zhǎng)下的吸光度值,以此反映血清中循環(huán)免疫復(fù)合物的含量。
5. 流式細(xì)胞術(shù):通過(guò)對(duì)熒光標(biāo)記抗體的使用,可以直接檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞表面或者內(nèi)部存在的免疫復(fù)合物。此方法具有高靈敏度和特異性,并且可以同時(shí)分析多個(gè)參數(shù)。
6. ELISA法:利用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),通過(guò)特定抗體捕獲血清中的循環(huán)免疫復(fù)合物并進(jìn)行定量測(cè)定。
以上這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、樣品類型以及檢測(cè)目的選擇合適的方法。
1. 聚乙二醇沉淀法:聚乙二醇可以降低水相溶劑的介電常數(shù),從而促進(jìn)免疫復(fù)合物的聚集并使其從溶液中沉淀出來(lái)。通過(guò)離心收集沉淀物,并進(jìn)行進(jìn)一步分析。
2. 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn):利用補(bǔ)體系統(tǒng)在免疫復(fù)合物形成過(guò)程中被激活的特點(diǎn)來(lái)間接檢測(cè)ICs。當(dāng)血清中的免疫復(fù)合物與紅細(xì)胞表面抗原發(fā)生反應(yīng)時(shí),會(huì)消耗掉一部分C3b成分,導(dǎo)致后續(xù)的溶血反應(yīng)減弱或消失。根據(jù)這種變化可判斷樣本中是否存在高水平的循環(huán)免疫復(fù)合物。
3. C1q固相試驗(yàn):基于C1q對(duì)免疫復(fù)合物具有高度親和力這一特性設(shè)計(jì)而成。將抗原包被于固相載體上,加入待測(cè)血清后若含有相應(yīng)抗體則會(huì)形成ICs;再添加標(biāo)記有酶的C1q,通過(guò)顯色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)ICs的存在。
4. 免疫比濁法:該方法利用免疫復(fù)合物在特定波長(zhǎng)下具有一定的光散射特性。將抗原與待測(cè)血清混合后,在一定條件下讓其充分反應(yīng)形成ICs;然后測(cè)定其在特定波長(zhǎng)下的吸光度值,以此反映血清中循環(huán)免疫復(fù)合物的含量。
5. 流式細(xì)胞術(shù):通過(guò)對(duì)熒光標(biāo)記抗體的使用,可以直接檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞表面或者內(nèi)部存在的免疫復(fù)合物。此方法具有高靈敏度和特異性,并且可以同時(shí)分析多個(gè)參數(shù)。
6. ELISA法:利用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),通過(guò)特定抗體捕獲血清中的循環(huán)免疫復(fù)合物并進(jìn)行定量測(cè)定。
以上這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、樣品類型以及檢測(cè)目的選擇合適的方法。
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